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【羧基-瓊脂糖凝膠 4B】使用方法
點擊次數(shù):1735 更新時間:2018-03-30

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【羧基-瓊脂糖凝膠 4B參數(shù)說明】

中文名:羧基-瓊脂糖凝膠 4B

英文名: ECH Sepharose 4B

供應(yīng)商:上海遠(yuǎn)慕

基質(zhì):4%瓊脂糖凝膠

耦合基團(tuán):氨基

顆粒大小:90μm

zui大流速:75cm/h

工作pH:3-14

操作溫度:室溫

保存條件:貯存于4°C-8°C(保存溶液為20%乙醇)

【羧基-瓊脂糖凝膠 4B】使用方法_參數(shù)說明

【羧基-瓊脂糖凝膠 4B】使用方法

 

【羧基-瓊脂糖凝膠 4B簡介說明】

羧基-瓊脂糖凝膠4B是用由環(huán)氧樹脂耦合方法將6-氨基已酸共價鍵偶聯(lián)到瓊脂糖4B上;羧基-瓊脂糖凝膠4B含有一個10個碳原子連接臂自由羧基,耦合氨基基團(tuán)的配體;長長的間隔臂使它特別適合固定的小分子。

 

【羧基-瓊脂糖凝膠 4B使用方法】

1、乙醇浸泡:在室溫下,將干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小時,并不斷攪拌以保證凝膠溶脹,用無鹽水洗去殘存的乙醇濾干;

2、無鹽水浸泡:室溫下,在無鹽水中充分溶脹24小時,間隙攪拌,以保證凝膠的*溶脹,然后;

3、鹽酸浸泡:在常溫下再用0.2NHCl浸泡12小時,間隙攪拌,濾干,水洗只中性;

4、將溶脹好的凝膠脫氣后(真空抽濾或超聲波)根據(jù)裝柱要求一次性置入柱內(nèi),注意保持濕態(tài)裝柱,并避免柱內(nèi)產(chǎn)生氣泡或斷層;

5、上樣前平衡層析柱至少3-5個柱體積直到記錄儀基線變得平穩(wěn)為止(流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值);

6、凝膠過濾的上樣量一般為5%的柱床體積,我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積,視分離情況可以調(diào)整;脫鹽時上樣量可以達(dá)到20%的柱床體積,柱高的選擇也與分離要求相關(guān),柱高控制在40-50cm以下,過高的凝膠層會引起較大的反壓,應(yīng)當(dāng)盡可能避免。難分離物質(zhì)要有一定柱高和流速控制,脫鹽時高徑比為5:1即可;

7、洗脫方法:可以用無鹽水,也可以采用上柱時的緩沖液洗脫;在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以*分離純化;

8、在位清洗(CIP)凝膠使用十次后作一次CIP,目的是去除柱床內(nèi)沉淀的及頑固殘留的蛋白。方法是以40cm/h用1M氫氧化鈉反向洗四個柱體積,再以至少三個柱體積平衡緩沖液再生。

  

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