抗體是生物學(xué)科研工作中有力的工具，沒有之一。這些“制導(dǎo)武器”，會(huì)在研究中主動(dòng)尋找并結(jié)合研究者感興趣的目標(biāo)，并可通過各種示蹤技術(shù)將目標(biāo)展現(xiàn)出來。正是由于抗體的專一特性，研究者可能會(huì)依賴于示蹤實(shí)驗(yàn)所顯示的結(jié)果對(duì)所研靶標(biāo)給出定性或定量的判斷。也正因此，毫無疑問的，專一性或特異性是抗體zui受科研工作者關(guān)注的特性。那么，抗體特異性主要由什么決定？為什么常聽到多抗特異性不如單抗的說法？在實(shí)驗(yàn)中，是該選擇單抗還是多抗？

下面我們將就抗體的生產(chǎn)制備過程分析抗體特異性差異的原因。

• 我們不“生產(chǎn)”抗體，我們只是大自然的“篩選”工

抗體的制備，無論是單抗還是多抗，其前期的動(dòng)物免疫步驟是*相同的，差異僅僅在篩選。或者說，單抗是在多抗制備的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步篩選并穩(wěn)定表達(dá)特異單克隆細(xì)胞株的結(jié)果。當(dāng)抗原免疫動(dòng)物后，在淋巴結(jié)和脾等淋巴器官內(nèi)通過一系列抗原處理和遞呈，促使B淋巴漿母細(xì)胞（Plasmablasts, PBs）分化成熟，在轉(zhuǎn)錄水平成為分泌特異抗體的B淋巴漿細(xì)胞（Plasma cells, PCs），大量不同的漿細(xì)胞會(huì)分泌不同的針對(duì)抗原的抗體。由此，可以說每一個(gè)B漿細(xì)胞都成為一株單克隆抗體的候選者。

傳統(tǒng)的單克隆抗體制備就是通過將小鼠脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞系融合，篩選能夠分泌特異抗體并穩(wěn)定傳代的融合細(xì)胞株而實(shí)現(xiàn)的。而多克隆抗體（多抗）的制備就是從血清中分離純化所有的未經(jīng)篩選的單克隆抗體。從以上過程可以看出，無論是單抗還是多抗制備方法，其針對(duì)靶點(diǎn)（抗原）的特異性抗體的產(chǎn)生主要源于被免疫動(dòng)物自身的漿細(xì)胞分化成熟，抗體生產(chǎn)者（人）其實(shí)并沒有做什么。

不同在于，多克隆抗體猶如許多單克隆抗體的集合，它們有的特異性高，有的特異性低，總體特異性符合正態(tài)分布曲線的形式（如Fig1），而其特異性的總體表現(xiàn)也應(yīng)處于統(tǒng)計(jì)學(xué)正態(tài)曲線中位線（MID）的水平。而單抗制備后續(xù)的篩選過程，可去除大部分的非特異抗體，保留幾株特異性較好的單克隆抗體。

Fig1. 單抗與多抗特異性示意圖

• 傳統(tǒng)雜交瘤法篩選單抗的缺陷

然而，單抗制備過程中的細(xì)胞融合是一個(gè)隨機(jī)發(fā)生的過程，動(dòng)物脾臟內(nèi)的各種細(xì)胞如內(nèi)皮、平滑肌、巨噬、NK、T、還有紅細(xì)胞、血小板等都可能與骨髓瘤細(xì)胞系發(fā)生融合。盡管B細(xì)胞是脾臟內(nèi)主要的淋巴細(xì)胞，但能夠分泌特異性抗體的成熟漿細(xì)胞占脾細(xì)胞的比例很低，加之促細(xì)胞融合試劑如PEG等的細(xì)胞毒性，使得終成功融合形成穩(wěn)定表達(dá)特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞系的效率極低，大約為10^-6。因此，在單抗制備過程中，大部分分泌特異性抗體的B細(xì)胞可能都被損失了。終獲得的單克隆抗體其親和力和特異性可能都不是本次免疫中的。

Fig2. 單克隆抗體制備流程

假如把每個(gè)漿細(xì)胞比作一個(gè)士兵，人就是指揮官，指令新兵們訓(xùn)練打靶。打靶的次數(shù)（免疫次數(shù)）增多后，會(huì)有越來越多的新bing變成神槍手。指揮官將好的神槍手挑出來，培養(yǎng)成一個(gè)一個(gè)的“ju擊手”（單克隆抗體）。然而，ju擊手的選拔機(jī)制卻是簡(jiǎn)單粗暴的，且與ju擊能力無關(guān)，比如能否舉起200 kg的杠鈴，這可能將真正的ju擊手淘汰掉了。而多抗就像一個(gè)經(jīng)過訓(xùn)練的老兵連隊(duì)，既有槍法平庸的兵，同時(shí)也擁有的ju擊手。