人和動物細胞的取材是原代細胞培養(yǎng)成功的首要條件，直接影響細胞的體外培養(yǎng)。所以今天詳細給大家分享一下有關(guān)原代細胞的取材，想了解的小伙伴往下看喲~
 

       一、取材的基本要求

 

　　1.取材要注意新鮮和保鮮
 

　　2.應(yīng)嚴格無菌
 

　　3.防止機械損傷
 

　　4.去除無用組織和避免干燥
 

　　5.應(yīng)注意組織類型、分化程度、年齡等
 

　　6.作好記錄
 

　　二、各類組織的取材技術(shù)
 

　　皮膚和粘膜的取材
 

　　內(nèi)臟和實體瘤的取材
 

　　血液細胞的取材
 

　　骨髓、羊水、胸/腹水細胞取材
 

　　動物組織取材
 

　　人胚體組織取材
 

　　雞(鴨)鳥類胚胎組織取材
 

　　皮膚和粘膜的取材
 

　　主要取自于手術(shù)過程中的皮片，方法似外科取斷層皮片手術(shù)操作，但面積一般2~4c㎡。
 

　　內(nèi)臟和實體瘤的取材
 

　　內(nèi)臟除消化道外基本是無菌的，但取材時要明確和熟悉所需組織的類型和部位，實體瘤取材時要取腫瘤細胞豐富的區(qū)域，要避開破潰、壞死液化部分，以防污染，盡量去除混雜的結(jié)締組織。
 

　　血液細胞的取材
 

　　血細胞、淋巴細胞的取材，一般多抽取靜脈外周血，或從淋巴組織中(如脾、扁桃體、胸腺、淋巴結(jié)等)分離細胞，取材時應(yīng)注意抗凝。
 

　　骨髓、羊水、胸/腹水細胞取材
 

　　嚴格無菌，注意抗凝，還要盡快分離培養(yǎng)，離心后，用無鈣、鎂PBS洗兩次，再用培養(yǎng)液洗一次后即可培養(yǎng)，不宜低溫存放。
 

　　動物組織取材
 

　　鼠胚組織取材
 

　　首先用引頸或氣管窒息致死法處死孕期合適的動物，然后將其整個浸泡在含有75%酒精的燒杯中，5min后(注意時間不能太長，以避免酒精從口或其他通道進入體內(nèi)，影響組織活力)，取出動物，在消毒過的木板上可用無菌的圖釘或大頭針固定四肢，切開皮膚，用無菌操作法解剖取胚或用無菌止血鉗挾起皮膚、用無菌眼科剪沿軀干中部環(huán)形剪開皮膚，用止血鉗分別挾住兩側(cè)皮膚拉向頭尾，把動物反包，暴露軀干，然后再固定，更換無菌解剖器材，采用無菌操作法解剖取出胚胎。
 

　　幼鼠胚腎(或肺)取材
 

　　幼鼠采用上述方法處死消毒后，腹部朝上固定在木板上，先切開游離毛皮并拉開至兩側(cè)：然后采用無菌法打開胸腔取肺，或背部朝上固定在木板上，先將背部毛皮切開游離并拉向兩側(cè)，然后采用無菌法從背部打開腹腔取腎。
 

　　人胚體組織取材
 

　　取材方法與鼠類相同
 

　　雞(鴨)鳥類胚胎組織取材步驟
 

　　(1)取孵化至適當胚齡(9~12天)的胚蛋，用照蛋燈在暗處燈檢，若有豐富血管、胚體有運動的胚蛋，說明胚體發(fā)育良好，并用有色筆劃出氣室和胚體位置。
 

　　(2)將胚蛋置于蛋架上，先用溫水清洗蛋殼，再用75%酒精棉球擦干；
 

　　(3)經(jīng)碘酒、75%酒精消毒后，在無菌條件下采用無菌法用剪刀或中號鑷子打開氣室，沿氣室邊緣去除蛋殼；
 

　　(4)用眼科鑷撕去殼膜，暴露出雞胚；
 

　　(5)用彎頭鑷輕挑起胚頭，取出胚胎，放入無菌平皿中，解剖取材。
 

　　以上關(guān)于原代細胞的取材介紹到這里，有需要的小伙伴可以收藏起來！