MTT 溶液(5mg/ml)

產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 

    MTT 比色法是一種檢測(cè)細(xì)胞存活和生長的方法。 MTT 細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的檢測(cè)。 MTT 檢測(cè)原理在于活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性 MTT 還原為水不溶性的藍(lán)紫色 Formazan 并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。 在特定溶劑 (如 DMSO)存在的情況下，可以被*溶解。然后通過酶標(biāo)儀可以測(cè)定 570nm 波長附近的吸光度。細(xì)胞增殖越多越快，則吸光度越高；細(xì)胞毒性越大，則吸光度越低。 

產(chǎn)品組成： 

自備材料： 

1、 細(xì)胞培養(yǎng)液 

2、 胰蛋白酶消化液 

3、 低速離心機(jī) 

4、 96 孔培養(yǎng)板 

5、 細(xì)胞計(jì)數(shù)板或計(jì)數(shù)器 

6、 DMSO 或 Formazan solvent 

7、 搖床 

8、 顯微鏡 

9、 酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀 

操作步驟(僅供參考)： 

1、 細(xì)胞用含血清的培養(yǎng)液培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長期， 常規(guī)胰蛋白酶消化液消化細(xì)胞(懸浮細(xì)胞無需

    消化)。 

2、 低速離心，收集細(xì)胞沉淀。 

3、 用培養(yǎng)液重懸細(xì)胞沉淀，制備成單細(xì)胞懸液，并計(jì)數(shù)。 

4、 細(xì)胞接種于 96 孔培養(yǎng)板，一般接種密度為 3000～10000 /孔。通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔

    加 3000 個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入 6000 個(gè)細(xì)胞即可。具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)

    目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定。 

5、 37℃ 5%CO2 繼續(xù)培養(yǎng)或按照實(shí)驗(yàn)具體需要進(jìn)行培養(yǎng)，一般培養(yǎng) 6～24h。 

6、 按照實(shí)驗(yàn)具體要求，給予 0～20ml 干預(yù)藥物處理，37℃ 5%CO2 繼續(xù)培養(yǎng)至合適時(shí)間。 

7、 棄培養(yǎng)液，每孔加入 10ml MTT solution 和 100ml 新鮮培養(yǎng)液，在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)

    孵育 4h。 

8、 棄培養(yǎng)液，每孔加入 110ml DMSO，置搖床上低速振蕩 10 min，使結(jié)晶物充分溶解 。

8、 棄培養(yǎng)液，每孔加入 110ml DMSO，置搖床上低速振蕩 10 min，使結(jié)晶物充分溶解 。

    如果紫色結(jié)晶較小或較少，溶解的時(shí)間會(huì)短一些。如果紫色結(jié)晶較大或較多，溶解的時(shí)

    間會(huì)長一些。 

9、 在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀 570nm 測(cè)定 各孔吸光度。 

注意事項(xiàng)： 

1、 MTT solution(5mg/ml)盡量減少反復(fù)凍融的次數(shù)，以免失效 ，當(dāng)顏色變?yōu)榛揖G色時(shí)，

     請(qǐng)勿使用。 

2、 由于使用 96 孔板進(jìn)行檢測(cè)，如果細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長，應(yīng)注意蒸發(fā)問題。 

3、 MTT solution 在低溫情況下會(huì)凝固，使用前請(qǐng)置于室溫或 20～25℃水浴至全部融解

      后使用。 

4、 觀察 formazan 是否*溶解，亦可以借助 光學(xué)顯微鏡觀察。 

5、 培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)盡量細(xì)菌避免污染。 

6、 應(yīng)注意設(shè)立 OD 調(diào)零孔和對(duì)照。 

7、 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。 

有效期： 12 個(gè)月有效。