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病毒血清學檢測的實驗方法
點擊次數(shù):466 更新時間:2021-11-26

首先,你得知道什么是病毒血清學檢測,按照bai度百科的解釋,病毒血清學檢測是利用抗原與抗體的特異性反應(yīng)檢測病毒及其抗體的血清學技術(shù)。包括中和實驗、紅細胞凝集實驗、補體結(jié)合實驗、蛋白檢測以及發(fā)光物質(zhì)和熒光素標記的酶聯(lián)免疫吸附試驗( ELISA)等方法。近年來,免疫組化、免疫共沉淀、免疫轉(zhuǎn)印等技術(shù)在臨床也有了更多的運用,為病毒感染的實驗室檢測提供了基礎(chǔ)。

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一、血清樣本采集

在病程早期采集急性期血清,間隔2~3周后采集恢復(fù)期血清,有的病毒抗體出現(xiàn)早,應(yīng)間隔1周左右采集第2份血清,以便早期診斷。采血前建議患者清淡飲食,盡量空腹。

二、進行血清學檢測的必要性

與聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)或病原菌培養(yǎng)檢測方法相比,血清學檢測結(jié)果對疾病的感染過程提供了不同的見解。血清學檢測可以確定人群中已被感染并產(chǎn)生相應(yīng)抗體的“無癥狀感染者"以及感染后通過自身免疫系統(tǒng)產(chǎn)生相應(yīng)抗體達到自愈的人群,基于檢測樣本中抗體的血清學檢測可以快速,經(jīng)濟,高效,直觀地提供結(jié)果。

三、病毒血清學檢測的實驗方法

1.病毒中和實驗

是指病毒在活體內(nèi)或細胞培養(yǎng)中被特異性抗體中和而失去感染性的一種試驗??捎脕頇z查患病后或人工免疫后機體血清中抗體的增長情況,也可用來鑒定病毒或研究其抗原結(jié)構(gòu)。病毒中和實驗可以在細胞培養(yǎng)、雞胚或動物上進行,一般將抗體做稀釋,與一定量的病毒混合,然后檢測其在細胞培養(yǎng)、雞胚或動物上的感染性。終點是以抑制細胞病變(細胞培養(yǎng))或病毒復(fù)制(雞胚或動物)的抗體最高稀釋度來表示。中和抗體特異性高,維持時間較長,流行病學研究常用此法。

2.紅細胞凝集實驗

部分病毒如流感等表面有血凝素(糖蛋白),在一定條件下,能與雞、豚鼠紅細胞表面的糖蛋白受體結(jié)合而發(fā)生凝集現(xiàn)象。滴定病毒的血凝效價,便可大致估計病毒顆粒的數(shù)量(1個血凝單位=106病毒顆粒)。若血清中出現(xiàn)特異性抗體與相應(yīng)病毒結(jié)合后,使病毒失去凝集紅細胞的能力,從而抑制血凝現(xiàn)象的出現(xiàn),則稱為血凝抑制現(xiàn)象。利用血凝抑制實驗可以檢測和鑒定具有血凝特性的病毒,如流感病毒、乙腦病毒的輔助診斷和流行病學調(diào)查。該方法敏感、簡單、費用低,而且操作簡便。同時,也可用于抗體效價檢測。

3.補體結(jié)合實驗

用免疫溶血機制做指示系統(tǒng),來檢測另一反應(yīng)系統(tǒng)抗原或抗體的試驗,可以用于檢測動物血清中的病毒抗體,病毒抗原與抗體的相互反應(yīng)可以引起補體結(jié)合,最終可導致膜溶解。在補體結(jié)合試驗中,如果反應(yīng)系統(tǒng)中存在待測的抗體(或抗原),則抗原抗體發(fā)生反應(yīng)后可結(jié)合補體;再加入指示系統(tǒng)時,由于反應(yīng)液中已沒有游離的補體而不出現(xiàn)溶血,是為補體結(jié)合試驗陽性。如果反應(yīng)系統(tǒng)中不存在的待檢的抗體(或抗原),則在液體中仍有游離的補體存在,當加入指示系統(tǒng)時會出現(xiàn)溶血,是為補體結(jié)合試驗陰性。因此補體結(jié)合試驗可用已知抗原來檢測相應(yīng)抗體,或用已知抗體來檢測相應(yīng)抗原。

4.沉淀實驗

可溶性抗原(如細菌的外毒素、內(nèi)毒素、菌體裂解液、病毒的可溶性抗原、血清、組織滲出液等)與相應(yīng)抗體結(jié)合,在適當量電解質(zhì)存在下,形成肉眼可見的白色沉淀。目前臨床運用較少。

5.凝集實驗

顆粒性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合后發(fā)生凝集的血清學試驗。抗原與抗體復(fù)合物在電解質(zhì)作用下,經(jīng)過一定時間,形成肉眼可見的凝集團塊。臨床常用于鑒定菌種和梅毒感染的確認。

6.病毒蛋白檢測

病毒侵入宿主細胞后可合成自身結(jié)構(gòu)蛋白與非結(jié)構(gòu)蛋白,也可與宿主細胞發(fā)生相互作用而上調(diào)或下調(diào)宿主蛋白的表達,除直接檢測病毒外,也可檢測與病毒發(fā)生作用的蛋白。在檢測分類上可根據(jù)檢測對象分為抗原檢測和抗體檢測,也可根據(jù)檢測方法分為定性檢測和定量檢測,根據(jù)標記物結(jié)合于抗體還是抗原分為直接檢測和間接檢測。臨床常用病毒蛋白的檢測方法包括ELISA技術(shù)、免疫印跡技術(shù)等,均可用標記有酶、發(fā)光底物或熒光素的抗體或抗原檢測病毒抗原或針對病毒產(chǎn)生的抗體。

免疫酶染色技術(shù)包含直接免疫染色和間接免疫染色方法,直接免疫染色法利用熒光素或酶標記,可識別病毒抗原的特異性抗體與感染細胞或組織樣本作用,而間接免疫染色法是利用熒光素或酶標記抗抗體,用病毒特異性抗體與感染細胞或組織樣本作用后,再加入熒光素或酶標記的抵抗抗體作用。間接法較直接法敏感,而且使用方便,可用于多種病毒抗原的檢測,不需要提純病毒的特異性抗體和繁瑣的標記過程。


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