液相色譜對于很多人來說都是很好上手的儀器了，是屬于“易學(xué)難用”的儀器，有些經(jīng)驗豐富，用了好幾年的分析員們也會習(xí)慣于一些錯誤操作，引發(fā)出一些儀器的故障。液相色譜最常見的故障就是“堵”和“漏”，那么接下來遠(yuǎn)慕就以這兩點(diǎn)來分別說明。
 

　　堵

 

　　“堵”的表現(xiàn)現(xiàn)象就是柱壓異常升高，直接原因就是流路不暢。堵塞的主要位置就是在色譜柱的前端，最主要原因就是流動相里有雜質(zhì)，雜質(zhì)的主要來源就是細(xì)菌。
 

　　“堵”的原因
 

　　1、配制流動相時細(xì)菌污染
 

　　首先，我們要認(rèn)識到，一般的國產(chǎn)甲醇其實不需要額外過濾處理，直接使用沒有問題。即使是有些固態(tài)微粒雜質(zhì)，也能在液相流路系統(tǒng)最前端的過濾頭上排除，真正容易引起問題的，是水中的細(xì)菌。
 

　　新制備的純水在室內(nèi)放置幾天就會長菌，而這些細(xì)菌雖然肉眼不可見，卻足以堵塞柱填料顆粒的空隙，造成柱子很快報廢。這就是在配制流動相時造成的細(xì)菌污染的原因，解決它的方法很簡單，就是確保水的可靠性。
 

　　這里有兩種方式推薦：
 

　　(1)最/理想的方式當(dāng)然是購買實驗室專用純水機(jī)，既方便又可靠，質(zhì)量也放心。唯1的缺點(diǎn)就是價格不菲。
 

　　(2)成箱購買市售品牌純凈水，如，500mL一支的怡寶或娃哈哈，這些水的質(zhì)量足以應(yīng)付液相色譜的要求。先隨機(jī)抽取一支做一下細(xì)菌/平板實驗，待菌落數(shù)合格方可使用。這樣每次只要單獨(dú)開一支即可，也很方便。每次成本2元左右。
 

　　這里特別指出一個細(xì)節(jié)：在絕大多數(shù)書本上，凡談到配制流動相都會談到最后有一個過濾的步驟。但是從我們長期使用的實際效果來說，只要能保證水的質(zhì)量，這一步*可以也應(yīng)當(dāng)去除。
 

　　原因有以下三點(diǎn)：
 

　　(1)流動相過濾在理論上有好處，但是，實際操作時由于不可能做到專瓶專用，反而容易造成的交叉污染，對于配比復(fù)雜的流動相影響更大。
 

　　(2)流動相過濾在經(jīng)濟(jì)成本上不劃算。買一套過濾裝置要6000多元，且過濾器*是比較容易損壞的設(shè)備。最主要是過濾片的成本太高，一片就要幾十元。按一般液相柱的正常使用壽命計算，過濾片的成本會遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于色譜柱的成本。
 

　　(3)流動相過濾對于工作效率成本不劃算。使用溶劑過濾器有一個預(yù)清洗、裝備、使用、用后清洗，晾干的過程，至少也有一個小時的時間。這個成本也不能忽視。
 

　　(4)在實際工作未發(fā)現(xiàn)流動相不過濾會對柱壽命有任何影響。我們起碼有6年時間沒有做過流動相過濾的工作，但是和國內(nèi)同行相比較，在同等使用強(qiáng)度下我們的柱壽命是比較長的。
 

　　2、使用流動相時的細(xì)菌污染
 

　　流動相剛開始沒有長菌，在使用時卻產(chǎn)生了細(xì)菌污染。這主要是在使用多元液相色譜儀時的一種不良使用習(xí)慣造成的。
 

　　讓我們舉個例子：
 

　　50%的甲醇水流動相，有兩種使用方式。一種方式是在上機(jī)前就配好混合在一起，另一種方式是在流路A放純甲醇，流路B放純水。
 

　　從單純實驗效果來說，后一種有明顯的優(yōu)點(diǎn)：首先是簡單，不需要實驗者另個計算配比混合，其次就是比例準(zhǔn)確，能得到保留時間重復(fù)性極/好的實驗效果。
 

　　但是，它有一個致命的缺陷，就是純水在流動相瓶中幾天時間就會長細(xì)菌(很多情況下不僅僅用純水作流動相，而是用緩沖鹽溶液，本身就是優(yōu)質(zhì)肥料，細(xì)菌長得更迅速)，一旦有細(xì)菌柱子就壞得很快。所以這種方式要求操作人員每次實驗都要用新制備的純水，更要求在每次實驗后把水相換掉，換成甲醇沖洗干凈，這一點(diǎn)在實際工作中很多人意識不強(qiáng)，就是意識到了但多次使用中總有一兩次會遺漏，但是往往這一兩次就足以產(chǎn)生致命的影響。因為液相色譜柱的堵塞是不可逆的。
 

　　所以，寧可犧牲小小的保留時間的重復(fù)性，也不要用純水溶液作為流動相的一組。從實際實驗效果來說，我建議用10%的甲醇水代替純水溶液(以前我做過不同比例甲醇水的細(xì)菌總數(shù)實驗，在5%就基本可以抑菌，在10%及以上就可以*殺菌了)，這樣可以有效排除長細(xì)菌的隱患，既可作流動相，也可沖柱。就算是在配制流動相時會計算得麻煩一些，但是一次麻煩，終身受益。
 

　　3、不適當(dāng)操作：
 

　　(1)在更換零件時選擇的型號有誤，接口不是很匹配，在擰緊的時候產(chǎn)生變形而使得管路堵塞。
 

　　(2)樣品處理液凈化得不干凈，長期會在六通閥和柱之間形成阻塞不暢。
 

　　(3)在使用手動六通閥時，有些人可能由于手勁小的原因，轉(zhuǎn)動的不到位，于是造成流路形成了死堵，壓力快速升高超過警戒值。
 

　　(4)在使用金屬管路作出廢液管時，應(yīng)當(dāng)注意最好廢液瓶中先放一些水，并把廢液管的出口端放在液面下。如果位于在液相上且實驗使用較高濃度的緩沖鹽溶液，在停機(jī)時可能在出口端結(jié)晶成塊并造成堵塞。這種情況不常見，但卻的確發(fā)生過。
 

　　漏
 

　　液相色譜儀從流動相瓶到廢液瓶之間的流路是一個全封閉體系，內(nèi)部壓力很高，但外部卻能保證一滴不漏。如果某個部件發(fā)生了漏液，那就是故障所在。
 

　　漏液的原因分兩種：
 

　　(1)接觸硬件不當(dāng)
 

　　在更換零件如流路管或換柱時，換的接頭接口不匹配，造成漏液。要注意不同公司的柱子接頭很多是不同的，甚至同一家公司在不同時期生產(chǎn)的液相柱接頭也有很大區(qū)別。當(dāng)然選用PEEK接頭是一個較好的解決方法，不僅通用性好，而且靠手?jǐn)Q就能保證不漏液。
 

　　即使是接口本身是匹配的，但是如果操作不當(dāng)也會漏液，一種不當(dāng)就是力度把握不好，擰得太緊或太松；另一種不當(dāng)就是致命的錯誤：滑絲，這是往往是動手能力不太強(qiáng)，螺絲釘很少擰的工作者犯的錯誤，滑絲的后果不僅是漏液那么簡單，常造成重要部件的報廢。解決這個問題只能靠惡補(bǔ)基本功來實驗，那就是擰螺絲。
 

　　(2)使用儀器不當(dāng)
 

　　如果是輸送泵漏液，最常見的原因就是在活塞位置緩沖鹽析出造成。
 

　　析出的原因有兩個，一是使用緩沖鹽溶液時突然加入了純甲醇而析出，這種錯誤很容易避免，這是盡量不要用純的甲醇和純水。只要互相有10%的比例就不會出現(xiàn)這個問題。另一原因是在用緩沖鹽溶液(不論甲醇含量有多少)作流動相時，實驗結(jié)束后沒有換甲醇水沖洗，使得微滲的流動相干燥形成晶體造成。
 

　　不過，輸送泵漏液并不是非得馬上修不可，沖洗干凈并在以后的使用中多加小心一般都可以正常使用。
 

　　檢測器漏液是個很麻煩的事，一般都是吸收池的問題，更換的費(fèi)用相當(dāng)高。但是并不是說一定要馬上更換，還可以從實際實驗效果看能否湊合使用。