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流式CBA法用于細(xì)胞因子檢測的優(yōu)點(diǎn)及缺點(diǎn)
點(diǎn)擊次數(shù):1225 更新時(shí)間:2022-05-18

  細(xì)胞因子在體內(nèi)具有重要的病理作用,在感染、炎癥、自身免疫病、免疫缺陷疾病等狀態(tài)下,部分細(xì)胞因子會明顯變化,根據(jù)這些指標(biāo)可以判斷機(jī)體的免疫功能。血清、血漿或組織液中細(xì)胞因子檢測可以對疾病診斷和治療做出相應(yīng)評價(jià),具有重要的應(yīng)用價(jià)值。廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)以及腫瘤學(xué)等領(lǐng)域的流式細(xì)胞術(shù)是細(xì)胞因子檢測的一種方法。

由于血清、細(xì)胞培養(yǎng)上清、積液中的細(xì)胞因子含量低,不容易檢測,加上樣本數(shù)量少,傳統(tǒng)的方法無法滿足多因子檢測。流式微球捕獲芯片技術(shù)(CBA)微量樣本多重蛋白定量技術(shù),是用流式細(xì)胞儀對多重蛋白進(jìn)行定量檢測的方法,能夠同時(shí)對樣本中的多個(gè)指標(biāo)進(jìn)行定性、定量檢測,可用于細(xì)胞因子檢測。

流式細(xì)胞儀技術(shù)(FCM)技術(shù)可以應(yīng)用流式細(xì)胞儀,結(jié)合單克隆抗體技術(shù)、免疫熒光染

色技術(shù),對快速流動液體中的單細(xì)胞進(jìn)行多種參數(shù)測量和分析。CBA 檢測系統(tǒng)采用聚苯乙烯熒光微球連結(jié)特定的捕獲抗體,捕捉待測物,同時(shí)再加入待測物的熒光抗體,三者形成夾心復(fù)合物,通過流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測。流式細(xì)胞術(shù)的優(yōu)點(diǎn)是同時(shí)可以進(jìn)行多參數(shù)檢測,快速并且信息量大。

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(1)能夠同時(shí)對單個(gè)樣本進(jìn)行多種檢測

小鼠血清Th1/Th2/Th17 相關(guān)細(xì)胞因子是實(shí)驗(yàn)中經(jīng)常會用到的檢測指標(biāo),由于血清量少很難運(yùn)用傳統(tǒng)的方法如ELISA法進(jìn)行多因子檢測,而CBA 法正好能解決這一問題,它能夠一次性對血清中的IL-2、IL-4、IL-6、IFN-Υ、TNF、IL-10、IL-17A進(jìn)行定量檢測。美迪西可以為廣大醫(yī)藥研發(fā)人員提供細(xì)胞因子及生物標(biāo)志物的檢測服務(wù),其生物分析部基礎(chǔ)設(shè)施齊全、儀器設(shè)備先進(jìn),擁有的流式CBA、MSD、Luminex系統(tǒng)等高/端技術(shù)平臺可以進(jìn)行各種single plex或multiplex多形式的細(xì)胞因子和生物標(biāo)志物的檢測。

(2)所需樣本量少、靈敏度高等

傳統(tǒng)ELISA方法每項(xiàng)實(shí)驗(yàn)樣本用量50-200μl,而流式CBA檢測技術(shù)樣本用量少于50μl且分析靈敏度高達(dá)2.8pg/mL。對于稀有樣本,CBA只需少量樣本即可檢測細(xì)胞因子、抗體、抗原等多個(gè)指標(biāo)。

(3)穩(wěn)定性好

CBA 穩(wěn)定性好、可重復(fù)性高,能避免酶聯(lián)免疫放大技術(shù)使信號失真導(dǎo)致的假陽性。

流式細(xì)胞術(shù)檢測用于細(xì)胞因子檢測是一種相對快速、重復(fù)性好并能準(zhǔn)確定量的方法。但由于胞內(nèi)分析步驟復(fù)雜,涉及變異因素多,可能會出現(xiàn)結(jié)果不穩(wěn)定,較難重復(fù)等問題。

如在檢測血清時(shí),由于血清成分復(fù)雜,細(xì)胞因子含量差距大,實(shí)驗(yàn)中經(jīng)常會出現(xiàn)分群不明顯、微球聚集、濃度太低等現(xiàn)象,對實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成很大影響。如流式CBA法的微球由聚苯乙烯材料制作而成,血清加入微球之后如果沒有充分渦旋,容易沉淀聚集,細(xì)胞因子不能充分跟微球結(jié)合,導(dǎo)致多群甚至聚集現(xiàn)象發(fā)生,檢測結(jié)果將是無效的。需要從制備混合微球開始到加入實(shí)驗(yàn)管,直到上機(jī)檢測前每一步都必須充分渦旋,以避免微球發(fā)生聚集。

而且CBA操作過程繁瑣,對實(shí)驗(yàn)人員技術(shù)要求高,從一定程度上限制了其廣泛使用。因此在具體實(shí)驗(yàn)過程中,需要多次摸索,結(jié)合實(shí)驗(yàn)中所遇到的問題進(jìn)行分析,找出解決問題的辦法,并在今后實(shí)驗(yàn)中規(guī)避實(shí)驗(yàn)中的一些問題的出題,來提高實(shí)驗(yàn)的有效性和準(zhǔn)確性。

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