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細(xì)菌對(duì)于蛋白質(zhì)和氨基酸的代謝試驗(yàn)
點(diǎn)擊次數(shù):525 更新時(shí)間:2022-05-31

 細(xì)菌對(duì)于蛋白質(zhì)和氨基酸的代謝原理為:不同種類的細(xì)菌分解蛋白質(zhì)的能力不同。細(xì)菌對(duì)蛋白質(zhì)的分解,一般先由胞外酶將復(fù)雜的蛋白質(zhì)分解為短肽(或氨基酸),滲入菌體內(nèi),然后再由胞內(nèi)酶將肽類分解為氨基酸。具體試驗(yàn)方法有:①明膠液化試驗(yàn);②吲哚試驗(yàn)(靛基質(zhì)試驗(yàn));③硫化氫試驗(yàn);④尿素酶試驗(yàn);⑤苯丙/氨酸脫氨酶試驗(yàn);⑥氨基酸脫羧酶試驗(yàn)。

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1.明膠液化試驗(yàn)

(1)原理:某些細(xì)菌可產(chǎn)生一種胞外酶-明膠酶,能使明膠分解為氨基酸,從而失去凝固力,半固體的明膠培養(yǎng)基成為流動(dòng)的液體。

(2)方法:將被檢菌穿刺接種于明膠培養(yǎng)基,于22℃培養(yǎng)7d,逐日觀察結(jié)果。若用35℃孵育,因明膠在此溫度下自行液化,故在觀察結(jié)果前,先置4℃冰箱內(nèi)30min,再看結(jié)果。

(3)結(jié)果:培養(yǎng)基呈液化狀態(tài)為陽(yáng)性。

(4)應(yīng)用:腸桿菌科細(xì)菌的鑒別,如沙雷菌、普通變形桿菌、奇異變形桿菌、陰溝桿菌等可液化明膠,而其他細(xì)菌很少液化明膠。有些厭氧菌如產(chǎn)氣莢膜梭菌、脆弱類桿菌等也能液化明膠。另外多數(shù)假單胞菌也能液化明膠醫(yī)學(xué)教|育網(wǎng)搜集整理。

2.吲哚(靛基質(zhì))試驗(yàn)

(1)原理:某些細(xì)菌具有色/氨酸酶,能分解蛋白胨水中的色/氨酸生成吲哚(靛基質(zhì)),當(dāng)加入吲哚試劑(對(duì)位二甲氨基苯/甲醛)后則形成紅色的玫瑰吲哚。

(2)培養(yǎng)基:蛋白胨水培養(yǎng)基。

(3)方法:將待檢菌接種于上述培養(yǎng)基中,于35℃培養(yǎng)24~48h,沿試管壁慢慢加入吲哚試劑。

(4)結(jié)果:于兩者液面接觸處出現(xiàn)紅色為陽(yáng)性,無(wú)色為陰性。

(5)應(yīng)用:主要用于腸桿菌科細(xì)菌的鑒定。

3.硫化氫試驗(yàn)

(1)原理:某些細(xì)菌能分解培養(yǎng)基中的含硫氨基酸(如胱/氨酸、半胱氨/酸)產(chǎn)生硫化氫,硫化氫遇鉛或亞鐵離子則形成黑褐色的硫化鉛或硫化鐵沉淀。此試驗(yàn)可間接檢測(cè)細(xì)菌是否產(chǎn)生硫化氫。

(2)培養(yǎng)基:醋酸鉛培養(yǎng)基。

(3)方法:將待檢菌穿刺接種于醋酸鉛培養(yǎng)基,于35℃培養(yǎng)24~48h觀察結(jié)果。

(4)結(jié)果:培養(yǎng)基變黑為陽(yáng)性,不變?yōu)殛幮浴?/span>

(5)應(yīng)用:主要用于腸桿菌科中屬及種的鑒別。如沙門菌屬、愛(ài)德華菌屬、亞利桑那菌屬、枸櫞酸桿菌屬、變形桿菌屬細(xì)菌,絕大多數(shù)硫化氫陽(yáng)性,其他菌屬陰性。沙門菌屬中也有硫化氫陰性菌種。

4.尿素分解試驗(yàn)

(1)原理:某些細(xì)菌具有尿素分解酶,能分解尿素產(chǎn)生大量的氨,使培養(yǎng)基呈堿性。

(2)培養(yǎng)基:尿素培養(yǎng)基。

(3)方法:將待檢菌接種于尿素培養(yǎng)基,于35℃培養(yǎng)18~24h觀察結(jié)果。

(4)結(jié)果:培養(yǎng)基呈堿性,使酚紅指示劑變紅為陽(yáng)性,不變?yōu)殛幮浴?/span>

(5)應(yīng)用:主要用于腸桿菌科中變形桿菌屬細(xì)菌的鑒定。奇異變形桿菌和普通變形桿菌脲酶陽(yáng)性。另外雷氏普羅威登菌和摩根菌為陽(yáng)性,而斯氏和產(chǎn)堿普羅威登菌陰性。

5.苯丙/氨酸脫氨酶試驗(yàn)

(1)原理:某些細(xì)菌可產(chǎn)生苯丙/氨酸脫氨酶,使苯丙氨/酸脫去氨基,形成苯/丙酮酸,加入氯化鐵試劑后產(chǎn)生綠色反應(yīng)。

(2)培養(yǎng)基:苯丙/氨酸瓊脂培養(yǎng)基。

(3)方法:將被檢菌濃厚接種于苯丙氨/酸瓊脂培養(yǎng)基斜面上,于35℃培養(yǎng)18~24h,滴加10%三氯化鐵試劑3~4滴,自斜面上方流下。

(4)結(jié)果:出現(xiàn)綠色為陽(yáng)性。應(yīng)立即觀察結(jié)果,延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)問(wèn)會(huì)引起褪色。

(5)應(yīng)用:主要用于腸桿菌科細(xì)菌的鑒定。變形桿菌屬、普羅威登斯菌屬和摩根菌屬細(xì)菌均為陽(yáng)性,腸桿菌種中其他細(xì)菌均為陰性。

6.氨基酸脫羧酶試驗(yàn)

(1)原理:具有氨基酸脫羧酶的細(xì)菌,能分解氨基酸使其脫羧生成胺(賴氨酸→尸胺,鳥(niǎo)氨/酸→腐胺,精/氨酸→精胺)和二氧化碳,使培養(yǎng)基變堿。使指示劑顯示出來(lái)。

(2)培養(yǎng)基:氨基酸脫羧酶培養(yǎng)基和氨基酸對(duì)照培養(yǎng)基。

(3)方法:將被檢菌分別接種于賴氨酸(或鳥(niǎo)氨/酸或精/氨酸)培養(yǎng)基和氨基酸對(duì)照培養(yǎng)基中,并加入無(wú)菌液體石蠟或礦物油,于35℃培養(yǎng)l~4d,每日觀察結(jié)果醫(yī)學(xué)教|育網(wǎng)搜集整理。

(4)結(jié)果:對(duì)照管應(yīng)呈黃色,測(cè)定管呈紫色(指示劑為溴甲酚紫)為陽(yáng)性,若測(cè)定管呈黃色為陰性。若對(duì)照管呈現(xiàn)紫色則試驗(yàn)無(wú)意義,不能作出判斷。

(5)應(yīng)用:主要用于腸桿菌科細(xì)菌的鑒定。如沙門菌屬中除傷寒和雞沙門菌外,其余沙門菌的賴氨酸和鳥(niǎo)氨/酸脫羧酶均為陽(yáng)性。志賀菌屬除宋內(nèi)和鮑氏志賀菌外,其他志賀菌均為陰性。

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