遠(yuǎn)慕實(shí)驗(yàn)：細(xì)胞制備流程及轉(zhuǎn)化方法
點(diǎn)擊次數(shù)：604 更新時間：2022-06-01
細(xì)胞制備流程及轉(zhuǎn)化方法
1. 轉(zhuǎn)移0.2-1ml培養(yǎng)物至裝有500ml LB(或其他營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基)的1-2升搖瓶
2. 37°C下劇烈振蕩培養(yǎng)2-6小時
3. 定時監(jiān)控OD600值(培養(yǎng)1小時后每半小時測定一次)
4。 當(dāng)OD600值達(dá)到0.5-1.0時，從搖床中取出搖瓶，置于冰上冷卻至少15分鐘(需要的話這種方式可以存放培養(yǎng)液數(shù)小時)
5. 細(xì)胞在4°C 5000g下離心15分鐘，棄上清液(如需要，沉淀可在4°C的10%甘油中保存一兩天)
6. 用滅菌的冰水重懸浮細(xì)胞。先用渦旋儀或吸液管重懸浮細(xì)胞于少量體積中(幾毫升)，然后加水稀釋至離心管的2/3體積。
7. 照上面步驟重復(fù)離心，小心棄去上清液
8. 照上面步驟用滅菌的冰水重懸浮細(xì)胞
9. 離心，棄上清液
10. 用20ml滅菌的、冰冷后的10%甘油重懸浮細(xì)胞
11. 照上面步驟離心，小心棄去上清液(沉淀可能會很松散)
12. 用10%甘油重懸浮細(xì)胞至zui終體積為2-3ml
13. 將細(xì)胞按150μl等份裝入微量離心管，于-80°C保存
遠(yuǎn)慕優(yōu)勢：
1，全：公司提供上萬種產(chǎn)品，涵蓋了生物試劑，elisa試劑盒，標(biāo)準(zhǔn)品，培養(yǎng)基，原裝耗材等，基本上各種科研所需產(chǎn)品在我司都能找到。
2，新：產(chǎn)品更新速度較快，基本上每周都有新產(chǎn)品出現(xiàn)。
3，優(yōu)：產(chǎn)品質(zhì)量好，*。
4，品牌多：公司代理的試劑品牌：Amresco、Sigma、Fluka、Alfa、TCI、Merck等進(jìn)口品牌，國產(chǎn)品牌我們價(jià)格更優(yōu)，我們供應(yīng)優(yōu)級純，分析純，化學(xué)純，試劑級，基準(zhǔn)試劑，實(shí)驗(yàn)純，教學(xué)試劑，高純試劑，色譜純，光譜純，電子純等試劑級別（可根據(jù)客戶需求定制）。
5，售后：我公司具有優(yōu)質(zhì)的技術(shù)團(tuán)隊(duì)，產(chǎn)品一旦售出，實(shí)驗(yàn)過程中遇到困難可提供在線技術(shù)咨詢。使您使用產(chǎn)品時沒有任何的后顧之憂。
試劑處理提示：
1、購買后，請務(wù)必確認(rèn)標(biāo)簽上的注意事項(xiàng)。
2、做好預(yù)防顛倒，摔壞的措施和管理體制。
3、在使用前再次確認(rèn)標(biāo)簽上的注意事項(xiàng)。做好必要的安全對策。
4、對沒有標(biāo)明其危險(xiǎn)特性，有害特性的，也要慎重地進(jìn)行操作。
5、必須戴好防護(hù)用具，小心翼翼進(jìn)行操作。
6、請參照相關(guān)法規(guī)，文獻(xiàn)，MSDS等信息，理解并掌握好試劑的特性，再進(jìn)行安全操作。
7、通常購買試劑時要想到一次性用完。若估算不足有剩余的話，要更加注意其保管和管理。
8、萬一試劑操作者并非專業(yè)技術(shù)人員。必須在專業(yè)人士的指導(dǎo)監(jiān)督下進(jìn)行操作。
9、對于使用后的廢棄物，不要或舊的試劑，應(yīng)按照相關(guān)法律法規(guī)正當(dāng)處理。
細(xì)胞制備流程及轉(zhuǎn)化方法：
1. 轉(zhuǎn)移0.2-1ml培養(yǎng)物至裝有500ml LB(或其他營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基)的1-2升搖瓶
2. 37°C下劇烈振蕩培養(yǎng)2-6小時
3. 定時監(jiān)控OD600值(培養(yǎng)1小時后每半小時測定一次)
4。 當(dāng)OD600值達(dá)到0.5-1.0時，從搖床中取出搖瓶，置于冰上冷卻至少15分鐘(需要的話這種方式可以存放培養(yǎng)液數(shù)小時)
5. 細(xì)胞在4°C 5000g下離心15分鐘，棄上清液(如需要，沉淀可在4°C的10%甘油中保存一兩天)
6. 用滅菌的冰水重懸浮細(xì)胞。先用渦旋儀或吸液管重懸浮細(xì)胞于少量體積中(幾毫升)，然后加水稀釋至離心管的2/3體積。
7. 照上面步驟重復(fù)離心，小心棄去上清液
8. 照上面步驟用滅菌的冰水重懸浮細(xì)胞
9. 離心，棄上清液
10. 用20ml滅菌的、冰冷后的10%甘油重懸浮細(xì)胞
11. 照上面步驟離心，小心棄去上清液(沉淀可能會很松散)
12. 用10%甘油重懸浮細(xì)胞至zui終體積為2-3ml
13. 將細(xì)胞按150μl等份裝入微量離心管，于-80°C保存
