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淺談磷酸化和非磷酸化的抗體區(qū)別
點擊次數(shù):790 更新時間:2022-07-19
 

  1.磷酸化抗體的檢測的是出于活性狀態(tài)(磷酸化)的蛋白。

  2.磷酸化抗體只針對磷酸化位點設(shè)計,是一種位點特異性的多抗,這到有些單抗的特性。

  3.普通抗體的合成(多抗):原核表達(dá)蛋白->純化->免疫動物->收獲抗體。

  4.磷酸化抗體合成:人工合成含磷酸化位點的多肽->人工體外磷酸化->鏈接半抗原->免疫動物->收獲抗體。

  5.磷酸化的蛋白很大部分是轉(zhuǎn)錄相關(guān)因子。因此使用磷酸化抗體和普通抗體。檢測同一個蛋白,原位檢測可能具有不同的細(xì)胞定位。轉(zhuǎn)錄因子磷酸化后由細(xì)胞質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞核。

  6.一般而言,磷酸化蛋白的實驗結(jié)果與分子功能更直接相關(guān)。

  非磷酸化抗體是測該蛋白的含量,不能知道其活性狀態(tài),磷酸化抗體是測該蛋白的磷酸化水平如何,側(cè)重于了解該蛋白的一種活性狀態(tài)。

  磷酸化抗體主要是針對磷酸化位點制備的,檢測該蛋白在細(xì)胞受到刺激時該蛋白的變化情況(磷酸化水平增強還是減弱)。

  非磷酸化抗體(主要針對非磷酸化位點的肽段制備的)主要檢測組織或細(xì)胞中該蛋白的表達(dá)情況,組織分布或細(xì)胞中定位,同時可以作為磷酸化水平變化的內(nèi)參等。

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